青霉菌Penicillium pimiteouiense (PPLL2205）能够解聚褐煤芳香团簇结构，耦合硝酸氧化预处理，与只进行硝酸氧化预处理相比可提高褐煤腐植酸提取率。本研究对硝酸氧化耦合生物降解预处理工艺条件进行优化，旨在提高褐煤腐植酸的提取率。首先，采用单因素法确定褐煤提取腐植酸预处理过程8个因素（温度、时间、硝酸浓度、煤样粒度、煤装载量、接菌量、pH、摇床转速）的三个取值水平，再通过Plackett-Burman试验筛选显著影响提取率的工艺参数，结合Box-Benhnken试验拟合得到响应曲面模型，预测硝酸氧化耦合生物降解的最佳预处理工艺条件。结果表明，硝酸浓度、降解温度和时间为影响提取率的显著因素，优化得最佳预处理工艺条件为：5 mol/L硝酸氧化粒度为0.125 mm的褐煤，将氧化煤按1 g：100 mL的质量体积比装载于接种有1.5% PPLL2205的培养液中，调节pH为7，在温度为30 °C、转速为230 r/min下处理15 d，再经碱溶酸提步骤，腐植酸产率可达87.16%。结合元素分析、紫外光谱分析及红外光谱分析结果，发现硝酸耦合生物预处理不仅能提高腐植酸的提取效率，还会改变其官能团结构。与仅用硝酸氧化处理相比，该预处理方法生成的腐植酸含有更多的含氧官能团、更低的芳香性和更小分子质量，能提高其提取率并增强其生物活性。

0 引 言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 实验方法
1.2.1 褐煤的预处理
1.2.2 腐植酸的提取
1.3 预处理工艺条件优化
1.3.1 单因素实验
1.3.2 Plackett-Burman试验设计
1.3.3 Box-Benhnken试验设计
1.4 腐植酸的表征
2 结果与讨论
2.1单因素实验结果与分析
2.2 Plackett-Burman实验结果与分析
2.3 Box-Benhnken实验结果与分析
2.4 响应面结果分析
2.5 腐植酸的元素分析和酸性基团含量分析
2.6 腐植酸的紫外光谱分析
2.7 腐植酸的FTIR表征
3 结 论