目的 结核病(Tuberculosis, TB)目前是全球单一感染源造成死亡的主要原因之一，且广泛接种的卡介苗对于不同人的效果不一且有一定的副作用，甚至在某些成年人身上效果甚微，为了获得效果更好、安全性更好的结核疫苗对融合蛋白RAP进行了分析验证。方法 将融合蛋白RAP连接到pET30b原核表达载体上通过双酶切鉴定构建重组质粒、用热休克法和诱导剂诱导蛋白表并通过Ni-NTA纯化蛋白；全血干扰素释放测定法(WBIA)检测RAP刺激的人外周血中IFN-γ的水平；ELISA法检测小鼠特异性IgG、IgG1和IgG2a以及IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4的分泌水平。结果 成功构建pET30b-RAP重组质粒并表达纯化RAP蛋白；RAP及其各组成蛋白能明显导致国内M.tb感染者分泌高水平的IFN-γ;小鼠经过RAP/MTO免疫后会发生Th1型反应产生特异性高滴度IgG抗体且使抗原特异性Th1型细胞因子分泌能力明显增强。结论 根据得到的实验结果推断出RAP具有强大且特异性的免疫能力，所以有希望成为一种有前景的结核病候选疫苗。

安徽理工大学医学专项培育项目(YZ2023H1B003,YZ2023H2C006)；

1 材料
1.1 质粒和菌株
1.2 主要试剂
1.3 实验动物
2 方法
2.1 引物的设计和合成
2.2 重组质粒的构建、表达和纯化
2.3 WBIA检测血中IFN-γ水平
2.4 动物实验
1)亚单位疫苗RAP/MTO制备
2) 实验小鼠分组和免疫
3)ELISA检测血中抗体分泌水平
4)ELISA检测细胞因子分泌水平
2.5 统计学分析
3 结果
3.1 成功构建pET30b-RAP
3.2 RAP的表达、纯化与鉴定
3.3 RAP诱导分泌高水平IFN-γ
3.4 小鼠分泌高滴度抗体
3.5 小鼠分泌高水平细胞因子
4 讨论

[1]刘新矿,王鑫鑫,王晓春.融合蛋白RAP的免疫原性分析[J].安徽理工大学学报(自然科学版),2024,44(03):101-108.