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作者
王晓春王艳许礼发毛莉蓉孔令雲张子安
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单位
安徽理工大学医学院
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摘要
目的 以结核分枝杆菌休眠期相关蛋白Rv3129作为研究对象，构建其重组质粒并进行原核表达，并通过体外人群实验、体内动物实验验证其免疫原性。方法 构建、表达并验证Rv3129蛋白，通过人外周血刺激释放实验、小鼠血清抗体水平检测以及各细胞因子检测实验验证该疫苗的免疫原性。结果 成功构建、表达及纯化rRv3129,可刺激M.tb感染人群外周血能够有效分泌高水平IFN-γ。动物实验中，初免增强策略下的亚单位疫苗Rv3129/DIM能够诱导强烈的Th1型免疫应答，分泌的抗体水平显著高于其他组别。结论 该亚单位疫苗具有较强的免疫原性，能够在机体内诱导强烈的Th1型免疫反应,对预防成人结核病可能具有重要意义。
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关键词
结核分枝杆菌亚单位疫苗卡介苗复合佐剂初免增强策略
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基金项目(Foundation)
安徽省高校自然科学研究重点资助项目(KJ2015A093,KJ2016A211)；
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文章目录
1 材料与方法
1.1 病毒株、菌株
1.2 实验动物
1.3 主要试剂
1.4 引物合成设计以及PCR扩增条件
1.5 重组质粒构建蛋白表达与纯化
1.6 WBIA检测人外周血IFN-γ水平
1.7 小鼠分组以及免疫
1.8 小鼠血清抗体水平检测
1.9 ELISA检测脾细胞分泌细胞因子水平
1.10 统计学分析
2 结果
2.1 pET30b-Rv3129成功构建
2.2 rRv3129成功表达、纯化及鉴定
2.3 rRv3129诱导外周血高水平IFN-γ
2.4 小鼠血清抗体水平显著升高
2.5 小鼠脾细胞产生高水平细胞因子
3 讨论
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引用格式
王晓春,王艳,许礼发,毛莉蓉,孔令雲,张子安.Rv3129的构建、表达、纯化以及免疫原性分析[J].安徽理工大学学报(自然科学版),2022,42(06):87-93.
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